L’rDNA codifica per le tre componenti strutturali dell’rRNA (18S, 5.8S, 28S) che sono presenti nei ribosomi di tutti gli eucarioti. La sua funzione nei meccanismi biologici essenziali alla cellula fa sì che la struttura dei geni dell’rDNA sia, in alcune parti , altamente conservata in tutti i metazoi.
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L’RNA (acido ribonucleico), rispetto al DNA, presenta 2 principali differenze: 1.Lo zucchero è il ribosio; 2.Al posto della timina c’è l’uracile (base pirimidinica) che si lega con l’adenina (base purinica) .
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Nei primi passaggi di purificazione delle proteine è spesso utile impiegare tecniche non cromatografiche di frazionamento selettivo, ad alta capacità. Frazionamento con sali. Si basa sulla precipitazione delle proteine per ‘salting out’. I sali ad alte concentrazioni tendono a diminuire la solubilità proteica attraverso meccanismi piuttosto complessi. Si sa che gli ioni (anioni e cationi) liberati […]
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La localizzazione delle proteine da purificare influenza le metodiche che possono essere impiegate per ottenere un estratto grezzo di partenza. Per le proteine solubili extracellulari, cioè secrete in fluidi extracellulari (brodo di coltura nel caso di microrganismi; oppure fluidi biologici quali sangue, latte, urina etc.) in genere basta concentrare il liquido, perché la quantità di proteine […]
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Per la determinazione della concentrazione totale di proteina in una miscela sono disponibili molte tecniche, di cui descriviamo le più comuni. Parecchi di questi metodi non forniscono un concentrazione assoluta ma relativa rispetto ad uno stock di proteina standard che viene usata per la preparazione di una retta di taratura (spesso, per il basso costo, la facile reperibilità etc. si utilizza come standard l’albumina da siero bovino, o BSA).
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Il frazionamento conseguenza della centrifugazione La centrifugazione è una tecnica separativa basata sulle differenze di densità e dimensioni tra le particelle presenti in una miscela. L’equazione fondamentale che descrive la velocità di sedimentazione di una particella in sospensione. Esiste un’ equazione che spiega la velocità limite della particella dipende essenzialmente dalle dimensioni e dalla densità della […]
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Materiale richiesto per PCR Pcr materiale ed equipaggiamento e materiali richiesti: Dna stampo (0.1 g/ μl ), Primer diretto (10 M ), Primer opposto (10 M ), Taq Dna polimerasi ( 5U/ μl ), Tampone 10x, Mix di dNTP (10 mM di ciascun dNTP ), MgCl2 25 mM, cofattore per la Taq, Acqua priva di […]
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il Dna plasmidico può essere separato ed analizzato tramite diverse tecniche che riporto di seguito. una di queste è una tecnica di separazione basata sul movimento di molecole cariche in un campo elettrico. Sotto l’azione di un campo elettrico particelle cariche migrano verso l’elettrodo di segno opposto. Forze che concorrono alla migrazione: forza di spinta e […]
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Crescita della coltura batterica, Preparare il liquido LB medium. Luria-Bertani Medium è un ricco brodo per la crescita di E. coli costituito da : • Triptone 10g, • Estratto di lievito 5g, • NaCl 10 g. Addizionare a 950 ml di H2O deionizzata. Al brodo liquido si aggiunge per ogni litro, 15 g di Agar per […]
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L’interferenza è un fenomeno tipicamente ondulatorio, adeguatamente conosciuto nel 1600 – ‘700 per quanto riguarda le onde meccaniche (sonore in particolare). La natura della luce ormai svelata? Nella prima metà del secolo XIX si poteva dire di aver ormai definito la natura della luce e di aver spiegato ompletamente tutti i fenomeni luminosi. Un quadro sintetico delle […]